問117薬剤師 第101回

117 / 345問

ヒト細胞における既知遺伝子の発現をPCR（polymerase chain reaction）法により検出するために以下の実験を行った。実験方法と考察に関する記述のうち、正しいのはどれか。2つ選べ。

【実験】 ヒト細胞から抽出したRNAを用いて、逆転写反応により相補的DNA（cDNA）を合成した。このcDNAを鋳型として、既知遺伝子の部分的塩基配列を増幅する特異的なセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを用いて、定法に従い 24、26、29及び 33サイクルでのPCR法を行った。得られた増幅DNA断片をDNA検出試薬を含むアガロースゲル電気泳動法にて分離し、図のような結果（レーン１〜４）を得た。なお、レーン番号の順序は、サイクル数の順序とは一致しない。また、各サイクルでのDNA増幅率はほぼ 100％であり、上記サイクル数の間では、DNAは指数関数的に増幅された。

1. 1PCRとは、DNAの熱変性→プライマーのアニーリング→ DNA鎖の合成・伸長からなる３段階反応を同一の温度下において繰り返すことで、目的DNAを増幅する反応である。×
2. 2本実験で行った逆転写反応では、mRNAの 5ʼ末端に相補的な配列をもつプライマーを用いた。×
3. 3レーン１〜４のDNA断片のうち、レーン１は 26サイクルのDNA断片と考えられる。○
4. 4図の結果より、増幅されたDNA断片は正の電荷を帯びていると考察できる。×
5. 5図中のレーン２とレーン３では、両者のDNA量は理論上約 16倍異なると考察される。○

2つえらぶと、答えと解説が出ます