問116薬剤師 第105回
116 / 345問タンパク質Ｘは、細胞質内ではサブユニットＡ（分子量 60，000）とサブユニットＢ（分子量 30，000）がそれぞれ 1 つずつ非共有結合で会合したヘテロ二量体を形成している。タンパク質Ｘは、増殖因子Ｆの刺激によりサブユニットＡのみチロシン残基がリン酸化され、サブユニットＢと解離する。 培養細胞を用いて以下の実験を行った。予想される結果として正しいのはどれか。1つ選べ。 ① Ｆでこの細胞を刺激した。同時に未刺激の細胞も用意した。 ② それぞれの細胞を破砕して細胞抽出液を得た。 ③ 各細胞抽出液に、サブユニットＡに対する抗体（抗Ａ）を添加して免疫沈降（注 1）を行った。 ④ 沈降物を三等分し、それぞれを SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。 ⑤ 分離したタンパク質をニトロセルロース膜に電気的に転写し、抗リン酸化チロシン抗体（抗 Pi-Tyr）（注 2）、抗Ａ、サブユニットＢに対する抗体（抗Ｂ）をそれぞれ用いたウエスタンブロット法を行った。 ただし、Ｆによる刺激で、Ａ、Ｂ両サブユニットの発現量に変化はなく、分解も起こらないこと、また、チロシン残基がリン酸化されても、電気泳動移動度、抗Ａによる免疫沈降及びウエスタンブロット法における認識には変化がないことを確認している。 注 1：抗体を添加後、生じた免疫複合体を不溶性担体に吸着させて遠心分離によって回収する方法。 注 2：タンパク質中のリン酸化されたチロシン残基を特異的に認識する抗体。
選択肢をえらぶと、答えと解説が出ます
ここに答えと解説が出ます
正答 1解説
正解は1です。選択肢は抗Pi-Tyr・抗Ａ・抗Ｂの3枚のブロットに、未刺激（−）と刺激（＋）のバンドを描いた6通りの図です。抗Ａで沈降させると、未刺激ではＡにＢが結合したまま一緒に沈み、刺激後はリン酸化されたＡからＢが離れてＡだけが沈みます。よって抗Ａは−と＋の両方、抗Pi-Tyrは＋だけ、抗Ｂは−だけにバンドが出ます。分子量の大きいＡは泳動距離が短く上に、Ｂは下に出ます。これを満たすのは1です。2・4・6はＡとＢの位置が逆、3・4は未刺激のＡが無く、5・6は刺激後にＢが出ています。
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