カコモンノート

問114薬剤師 第107回

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第107回

薬物Aに感受性のある培養細胞を用いて、その細胞内の代謝調節タンパク質Bについて調べることにした。 操作の流れを図 1 に示す。培地に薬物Aを添加して細胞を 1 時間培養した後、培地を除去してから細胞を回収した。細胞を破砕し、低速度の遠心操作で核画分を分離回収した。さらに高速度の遠心操作で、核を除いた細胞の膜画分を分離回収した。また、対照として、培地に薬物Aを添加しなかった細胞についても同様の操作を行った。 ドデシル硫酸ナトリウムを用いたポリアクリルアミド電気泳動(SDS-PAGE)にて、核画分及び膜画分中のタンパク質を分離し、タンパク質Bに対するポリクローナル抗体を用いてウエスタンブロットを行った。SDS-PAGE は、還元剤(2-メルカプトエタノール)を添加した条件と添加しない条件の 2 通りの方法で行ったところ、図 2 に示す結果を得た。 以上の実験とその結果から推測される記述のうち、正しいのはどれか。2つ選べ。

この問題の図
問題に添えられた図。出典は下に書いています。

2つえらぶと、答えと解説が出ます

2つえらぶと、
ここに答えと解説が出ます
正答 2・3

解説

正解は2と3です。還元剤なしでは、薬物Aなしの膜画分(レーン2)に100 kDa付近のバンドがあり、還元剤を加えると70と100 kDaの間と20 kDaの2本に分かれるので、Bは分子間ジスルフィド結合をもちます。薬物A添加では核画分(レーン3)に約30 kDaのバンドが現れるので、切り出された断片が核へ移っています。無添加では核画分に出ないので1、分子量は約100 kDaなので5は誤りです。膜に残るのは70 kDa(還元で50と20 kDa)で、切断は1か所と読めるので4も誤りです。

KEY POINT
還元で分かれるバンド=S-S結合。薬物で核画分に出た断片=核移行
出典:厚生労働省「第107回薬剤師国家試験」問題(第2分冊)(厚生労働省)
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